결핵 T-SPOT.TB 검사 기술 및 원리
하나의 튜브. 진실을 판정하는 100만의 증인.1
결핵균(MTB) 감염에 대한 면역 반응은 주로 T세포 활성화를 통해 매개됩니다. 이 반응의 일환으로, T세포는 MTB 항원들에 의해 감작되며, 활성화된 반응기 T세포는 – CD4+와 CD8+ 모두를 포함 – 이들 항원에 의해 자극될 때 사이토카인 인터페론-감마를 분비합니다. 엘리스팟 (ELISPOT) 기술을 사용하는 T-SPOT.TB 검사에서는 T 세포가 분비한 인터페론-감마를 포착하여 결핵균에 감작된 T세포의 수를 계수합니다.
T세포에서 결핵 감염의 징후를 찾는 검사를 수행한다면, 얼마나 많은 수의 T세포가 검사에 포함 되었는지가 관건입니다. T-SPOT.TB 는 다른 검사들과는 달리, 매번 동일한 수의 세포를 사용합니다. 그리고, 상당한 수의 세포를 사용합니다. 하나의 웰 (Well) 에 25만개의 세포가, 총 4개의 웰에 사용됩니다.1 이들이 감염 여부를 판정하는 100 만의 증인이자, 결핵에 대한 진실의 순간입니다.
검사원리
준비
전혈에서 PBMC를
분리하고, 세척한 후,
세포수를 표준화
배양
항 IFN-γ 항체가 코팅된 Well에
PBMC와 결핵균 특이항원을 분주한 후,
배양(16~20시간)
시각화
유리된 IFN-γ를 접합 시약
(Conjugate Reagent)와
기질액(Substrate Solution)으로
시각화
판정
스팟수 기준으로 결과 판정
(1 SPOT = 1 T-Cell)
검사절차
T-SPOT 검사의 「분리」
T-SPOT 검사는 전혈이 아닌 말초혈액단핵구 (PBMC; Peripheral Blood Mononuclear Cell)만을 추출하여, 검체로 사용합니다. 검체 중에 섞여 있는 과립구는 과립을 배출하며, 이는 T-Cell 의 인터페론 감마 (IFN-γ; Interferon-γ) 생성능을 저하 시키는 것으로 알려져 있습니다.
IGRA 검사에 필요한 PBMC를 전혈로부터 분리하고, 결핵균 특이항원의 자극을 받은 T-Cell 에서 분비되는 IFN-γ 만을 측정함으로써, 검사의 특이도를 높입니다.
채혈 후, 8~32시간이 경과한 전혈에서 PBMC를 분리하는 경우, 검사 전 T-Cell Xtend (별도판매 구성품)을 첨가하여, 과립구와 적혈구를 함께 제거할 수 있으므로 32시간 동안 보관된 검체를 사용해도 신뢰할 수 있는 결과를 얻을 수있습니다.
T-SPOT 검사의 「세척」
PBMC 층을 분리한 후에도, 검체 중에는 다양한 간섭 물질 (예: 복용 중인 의약품, 혹은 면역 반응을 촉진하거나 저해할 수 있는 혈중 잔존 물질)들이 남아 있을 수 있습니다.
세척 단계에서는 이러한 잔존 간섭 물질들을 제거 합니다. 혈중에 비 특이적으로 유리되어 있는 IFN-γ 나, 항 IFN-γ 항체 등은 IGRA 검사의 특이도를 낮추는 주요한 요인이 됩니다.
T-SPOT 검사에 사용되는 검체는 분리 및 세척 단계를 거쳐 순도를 최대한으로 높이고, IGRA 검사 결과에 영향을 미칠 수 있는 생물학적, 실험적 변이 요소를 배제시킴으로서, 검사 결과의 신뢰도를 확보합니다.
T-SPOT 검사의 「표준화」
검체 당, PBMC의 수를 표준화하여 검사를 실시합니다.
일정량의 혈액 속에 존재하는 백혈구의 수치는 개인차가 있으므로, 피 검사자의 세표수를 표준화하지 않으면, 신뢰할 수 있는 검사 결과를 도출할 수 없습니다. 특히, 스테로이드나 면역 억제제 등을 복용 중인 환자에서는 백혈구의 수치가 감소되어 있으므로, 위양성이나 위음성 결과로 이어지거나, 판정 불가의 가능성이 높아집니다.
T-SPOT 검사는 개인 별 세포수의 차이를 표준화하여, 동일한 출발선 상에서 IFN-γ 분비 반응을 시작하므로, 피검사자의 세표수 차이 및 질환 여부가 검사 결과에 미치는 영향을 최소화하고, 결과의 민감도와 특이도를 최대화 합니다.
결과 판정
음성 (Negative)
① 과 ②의 Spot 수가 모두 6 미만인 경우
양성 (Positive)
① 혹은 ②의 Spot 수가 6이상인 경우
경계값 판정 (Borderline)
① 혹은 ②의 최대 Spot 수가 5, 6, 7인 경우
※ 경계값 범위에 걸쳐진 음성과 양성 판정은 여전히 유효한 결과이나, 컷-오프 수치(Spot=6)에서 큰 차이를 보이는 결과보다는 상대적으로 신뢰도가 낮을 수 있으므로, 재검사를 권고할 수 있습니다 1
판정불가 (Indeterminate)
Nil Control spot 수가 10 이상이거나, Positive Control Spot 수가 20 미만인 경우에는 재검사 합니다.1IGRA 검사는 T-세포의 민감한 면역반응을 측정하는 검사이므로, 미국 질병관리본부 (US CDC) MMWR 2010; 59 (No.RR-5)는 보더라인 값을 설정하면 위양성(False-positive) / 위음성(False-negative) 및 양전(Conversion) / 음전(Reversion)을 최소화하여 판정 결과의 정확성을 높일 수 있다고 권고하고 있습니다.2 T-SPOT.TB 검사는 식약처 및 미국 식약처로부터 경곗값 판정이 승인된 유일한 IGRA입니다.
1IGRA 검사는 T-세포의 민감한 면역반응을 측정하는 검사이므로, 미국 질병관리본부 (US CDC) MMWR 2010; 59 (No.RR-5)는 보더라인 값을 설정하면 위양성(False-positive) / 위음성(False-negative) 및 양전(Conversion) / 음전(Reversion)을 최소화하여 판정 결과의 정확성을 높일 수 있다고 권고하고 있습니다.2 T-SPOT.TB 검사는 식약처 및 미국 식약처로부터 경곗값 판정이 승인된 유일한 IGRA입니다.
2Center for Disease Control and Prevention. Updated Guidelines for Using Interferon Gamma Release Assays to Detect Mycobacterium tuberculosis Infection, United States.